帶你了解PCR基因擴(kuò)增儀常見(jiàn)故障及診斷

　　PCR基因擴(kuò)增儀主要功能包括多通道qPCR檢測(cè)，熔解曲線及數(shù)據(jù)分析管理等。儀器可以使用條形管或單個(gè)PCR管進(jìn)行PCR反應(yīng)。基于Android的操作系統(tǒng)，所有的儀器設(shè)置和分析功能，均受控于一個(gè)直觀的、易于使用的軟件界面，可進(jìn)行快速實(shí)驗(yàn)設(shè)置和數(shù)據(jù)分析。每個(gè)熱循環(huán)后，所有樣品的熒光強(qiáng)度與循環(huán)次數(shù)顯示不斷更新。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后報(bào)告可以使用Excel軟件導(dǎo)出和分析。

　　PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25～40個(gè)循環(huán)，呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)大待測(cè)樣本中的核酸拷貝數(shù)。

　　PCR基因擴(kuò)增儀常見(jiàn)故障

　　①熒光染料污染樣品孔；

　　②PCR管融化，原因可能是溫度傳感器出問(wèn)題或是熱蓋出問(wèn)題；

　　③個(gè)別孔擴(kuò)增效率差異很大，可能的原因是半導(dǎo)體模塊出現(xiàn)壞點(diǎn)；

　　④熒光強(qiáng)度減弱或不穩(wěn)定，產(chǎn)生的原因有濾光片發(fā)霉或有水汽，或光源損耗（以鹵鎢燈為光源的），需更換光源；或需調(diào)節(jié)檢測(cè)元件靈敏度；

　　⑤儀器工作時(shí)出現(xiàn)噪音。