如何提高磁珠法自動核酸提取的提取效率？

 

磁珠法——通過裂解液裂解細胞組織樣本，從樣本中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面，蛋白質等雜質不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附攜帶核酸的磁珠移動至不同的試劑槽內，通過反復快速攪拌、混勻液體，經過細胞裂解、核酸吸附、洗滌與洗脫等步驟，最終得到純凈的核酸。

　　

如何提高核酸提取效率，可以嘗試以下方法：

 

一、磁珠品質要好

 

首先，磁珠的四氧化三鐵核要能做到真正納米級，100納米以下；其次,在納米四氧化三鐵表面包裹二氧化硅要均勻密封；三是表面羥基含量要豐富。這樣的磁珠比表面積大，磁響應性能強，與核酸的結合能力與釋放能力都強。

 

二、裂解液品質好

 

對于提取胞內核酸的應用，我們需要對細胞進行裂解，釋放核酸；當裂解不充分時，釋放的核酸有限，即使磁珠的吸附能力再強，也很難獲得較高的得率。一般可以通過提高表面活性劑濃度，來增強裂解液的裂解能力，表面活性劑能夠破壞蛋白的結構，促進膜蛋白的變性，使得細胞膜破裂而充分釋放出核酸。

 

三、洗脫要充分

 

洗脫不充分有時候我們裂解結合液各種條件優化到了理想狀態，可是核酸得率仍然很低。這種情況有可能是磁珠結合了核酸，但是由于洗脫不充分，磁珠結合的核酸沒有被洗脫下來。一般來說0.5mg的磁珠，洗脫液的體積為70-100ul。