進階的PCR，了解一下

盤點PCR技術
PCR技術是模擬體內DNA的天然復制過程，在體外擴增DNA分子的一種分子生物學技術，主要用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA區段。

在模塊溫度到達設定的變性溫度之前，模塊內的樣品往往要一起經歷加熱的過程，此時Taq酶仍具有一定活性，部分的引物和模板會在酶的作用下進行非特異性的結合、延伸，消耗反應物， 導致特異性擴增減少。目前一般采用溫控系統或使用特殊Taq酶避免此現象的發生，稱之為熱啟動PCR。

 Long PCR（長片段PCR）則可以滿足較長片段的DNA片段的擴增需求，常用Taq酶和Pfu酶混合使用并配以特殊的緩沖液，避免錯誤的dNTP加入到片段中。在正常10-15個循環之后，每一個循環的延伸時間都要上一次循環的延伸時間多出10秒左右，以此配合完成正確的延伸。

由于影響PCR效率的因素有很多，比如引物、退火溫度，循環次數等，逐一驗證選擇適條件會花費大量的時間及成本，因此，降落PCR是針對一系列不太的退火時間來考量的：退火溫度的起始值高于T值15℃，每一個（或n個）循環后比之前的循環的退火溫度都要低，直到溫度等于或低于T值，此后，在低溫環境下再進行幾個循環，以此達到特異性擴增的目的。高溫環境能使部分特異性結合發生，再降溫，某些非特異性擴增已不具備優勢，因此能夠擴增。