PCR基因擴增儀“位置的邊緣效應(yīng)”實驗過程

　　

　　PCR基因擴增儀主要是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成，用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。PCR儀的原理為利用升溫使DNA變性，用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈，進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。

　　

　　PCR原理為雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制，多次重復(fù)“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級數(shù)大量擴增特定的基因。這就是PCR實驗過程.

　　

　　想得到一個的PCR實驗結(jié)果,zui關(guān)鍵所使用的PCR基因擴增儀,溫度均性是否穩(wěn)定均勻.PCR溫度均勻是指樣品孔間的溫度差異，它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品，同樣的PCR反應(yīng)程序，zui后的結(jié)果竟然差異非常明顯，或許就是因為不同位置的溫度不均一性所致。所以一些實驗人在做實驗中就固定用著那幾個孔，就是因為過往反復(fù)的教訓(xùn)和認(rèn)真的思索得出的結(jié)果.這個被我們稱為“位置的邊緣效應(yīng)”,即原因就是PCR儀的溫度均勻性不好，特別是zui外周的樣品孔，溫度不均勻就會影響實驗結(jié)果。